蛋白样本的质量决定着整个Western blot实验的成败，那么样本制备中的小细节小技巧你都了解吗？
Q1：贴壁细胞收集是刮下来好还是胰酶消化好？
两种方式都是可行的，各有利弊。不必担心刮刀收集会刮坏细胞，如果胰酶消化的程度掌握不好，也会让细胞破损。胰酶消化可能会对某些膜蛋白产生影响，刮刀收集效率会略低，可根据自己的实验来选择细胞收集的方式。做总蛋白提取时，可选择直接在器皿中进行裂解，无需提前收集。
Q2：所有 WB 实验都用总蛋白可以吗？
当然不行，要根据WB的实验目的来确定提取哪类蛋白，如需验证某些低丰度蛋白，或蛋白定位，或组分间表达量对比，则需要进行亚细胞结构分离或组分分离。
Q3：提蛋白时要加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂吗？
蛋白样品如果长期保存，或者下游实验过程较长，建议加入蛋白酶抑制剂。做磷酸化研究，一定要加入磷酸酶抑制剂！
Q4：蛋白酶抑制剂该如何添加？
内源性蛋白酶存在于胞浆中，所以要在细胞裂解前加入抑制剂到达最佳抑制效果，提取时将抑制剂添加到裂解液中。
Q5：用 RIPA 提取总蛋白为什么会有粘稠的不可溶沉淀？
产生粘稠物的主要原因是RIPA不能将所有样品全部裂解，产生的不可溶组分中主要含有核酸残团，细胞碎片（有些组织样品还含有油脂），和部分蛋白，因此RIPA提取的仅仅是可溶性蛋白，并非真正的总蛋白。
Q6：蛋白样本如何储存？
蛋白样品不建议久存，也不要反复冻融。下游做WB实验，建议蛋白浓度测定后，加入loading buffer煮沸，使蛋白充分变性，再根据实验需要分装成小管冻存，使用前拿出分装小管再次煮样即可。
Q7：组织样品含血量多可以直接提蛋白吗？
如果组织样品中含血较多，血红蛋白可能会影响下游实验，可以在组织样品裂解前使用红细胞裂解液进行处理后，再进行蛋白提取。
