实验室常用试剂配制方法

试剂名称

配制方法

备注

1MTris-HCl (pH7.4,7.6,8.0)

配制量：1L

称量121.1g Tris 置于1L烧杯中，加入800mL 去离子水，充分搅拌溶解，调节pH值，定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

应使溶液冷却至室温后再调定pH 值，Tris 溶液的pH值随温度变化差异很大，温度每升1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5M Tris-HCl (pH8.8)

配制量：1L

称量181.7g Tris 置于1L烧杯中，加入800mL 去离子水，充分搅拌溶解，调节pH值至8.8，定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

应使溶液冷却至室温后再调定pH 值，Tris 溶液的pH值随温度变化差异很大，温度每升1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

10×TEBuffer (pH7.4,7.6,8.0)

配制量：1L

量取100mL 1M Tris-HCl Buffer (pH7.4,7.6,8.0),20mL 500mM EDTA  (pH8.0) 。置于1L烧杯中，加入800mL 去离子水，混合均匀，定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

PBS Buffer

配制量：1L

称量NaCl (8g)、KCl (0.2g)、 Na2HPO4（1.42g）、K2HPO4 (0.27g) 置于1L烧杯中，加入800mL 去离子水，充分搅拌溶解，加入浓盐酸调节pH值至7.4，定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

上述PBS Buffer 中不含有阳离子，若需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5mM MgCl2

3M醋酸钠（pH5.2）

配制量：100mL

溶解40.8 g的CH3CONa∙3H2O于约40mL 水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容至100 mL。高温高压灭菌后，室温保存。

10M醋酸铵

配制量：100mL

将77.1g醋酸铵溶解于约80mL水中，加水定容至100mL后，用0.22µm孔径的滤膜过滤除菌。高温高压灭菌后，室温保存。

10%（W/V）SDS

配制量：100mL

称量10g高纯度的SDS置于100-200mL 烧杯中，加入80mL 去离子水，68℃加热溶解，加入盐酸调pH至7.2，定容至100mL，室温保存。

DEPC处理水

配制量：100mL

加100µLDEPC于100mL水中，37℃水浴12h以上，高温高压灭菌20min,使残余的DEPC失活，

DEPC会于胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

Blocking Solution(封闭血清)

用TBS或PBS将正常动物的非免疫血清配成浓度为5-10%（即1:10-20倍稀释）的工作液即可。

一般血清种属的选择为二抗来源的动物的血清。

1.5M Tris-HCl (pH8.8)

配制量：1L

称量181.7g Tris 置于1L烧杯中，加入800mL 去离子水，充分搅拌溶解，调节pH值至8.8，定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

应使溶液冷却至室温后再调定pH 值，Tris 溶液的pH值随温度变化差异很大，温度每升1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

Citrate Buffer (pH6.0)

柠檬酸盐缓冲液

配制量：1L

取该粉剂一包溶于1000 mL的蒸馏水中，混匀，其pH值在6.0±0.1

如因蒸馏水本身造成的pH值偏差，请自行调整

DAB

3,3’-二氨基联苯胺

DAB是辣根过氧化物酶的底物，其终产物为棕黄色沉淀，不溶于有机溶剂，可经酒精脱水、二甲苯透明后用中性树胶封片。

使用中需注意：1、DAB浓度不宜过高，否则极易增加背景染色，2、DAB有致癌作用，故操作时应小心，尽量避免与皮肤接触。

Glycerol-TBS或Glycerol-PBS

配制量：100mL

甘油90 mL，0.01M TBS 10 mL或甘油75mL，0.01M PBS 25 mL 按比例将甘油和TBS或PBS充分混匀，置4度冰箱静置，待气泡排除后方可使用。

如果是用于荧光显微镜标本德封片，其中所用的缓冲液pH值应为9.0-9.5；如果用于光学显微镜的封片，其中所用的缓冲液pH值应为7.0-7.4

HRP-Streptavidin Dilution Buffer

辣根酶标记链霉卵白素稀释液

成分0.01M TBS pH7.2，0.05% thimerosal (防腐剂)

Hydrogen Peroxide

3%过氧化氢

配制量：100mL

在90 mL的蒸馏水中或甲醇中加入10 mL的30%H2O2即可，用于封闭内源性过氧化物酶，通常处理时间为5-20分钟，一般使用浓度为3%，但也有使用0.3%的

冷冻切片推荐使用过氧化氢甲醇溶液；而石蜡切片两者均可。注意：用H2O2处理标本，对某些抗原的抗原性会有一定的影响。

Pepsin（胃蛋白酶0.4%）

胃蛋白酶消化液

消化时间为37℃，10-30分钟，主要用于细胞间质抗原的免疫组化。

Triton X-100

聚乙二醇辛基苯基醚

30% 的Triton X-100储备液：27.2 mL Triton X-100加72.8 mL 0.01M PBS pH7.3或0.05M TBS pH7.4混合，置37-40℃水浴中2-3小时，使其充分溶解混匀。用前取该储备液稀释至所需浓度

 免疫组化常用浓度为1%和0.3%；漂洗组织标本浓度为1%；稀释血清、配制BSA常用浓度为0.3%

Trypsine(胰蛋白酶，0.1%)

消化时间为37℃，5-30分钟

注要用于细胞内抗原的暴露