Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
CCK8的优点:
- 使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂;
- CCK-8法能快速检测;
- CCK-8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度;
- CCK-8法的重复性优于MTT法;
- CCK-8法对细胞毒性小;
- CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。
CCK8检测细胞增殖/毒性的注意事项
1. 酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰,可以通过扣除空白孔中本底的吸光值而消去。
2. CCK8可以检测大肠杆菌,但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染,以免影响结果。
3. CCK-8在0-5℃下能够保存至少 6 个月,在-20℃下避光可以保存1年。
4. 当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔容易干燥,导致体积不准确而增加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。
5. 在培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时,还应考虑药物的吸收,可在加入药物的培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度作为空白对照。
6. 金属对CCK-8显色有影响:当终浓度为1 mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10 mM的话,将会100%抑制。
7. 悬浮细胞由于染色比较困难,一般需要增加细胞数量和延长培养时间。